レンチウイルス パッケージング
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Cyagenでは、生物学研究における最高水準の安全性を確保するため、第三世代レンチウイルスシステムを採用しています。このシステムでは、複数の補助パッケージングプラスミドによりウイルスを構成し、ウイルスの再組換えリスクを最小限に抑える設計がなされています。
説明
● 転送プラスミド（Transfer plasmid）
導入遺伝子（ORFやshRNA配列など）は、5'LTRと3'LTRに挟まれた領域に配置されます。このLTR（Long Terminal Repeat）配列は、ゲノムへの組み込み時に重要な役割を果たし、通常、3'LTRには「自己不活性化（Self-inactivation）」を目的とした改変が施されています。これにより、ウイルスの複製能力が失われ、遺伝子導入後の安全性が大幅に向上します。
● パッケージングプラスミド（Packaging plasmids）
Gag、Pol、Revなどの構成タンパク質は、別個のパッケージングプラスミドから供給されます。これにより、ウイルス粒子の生成に必要な成分を補完しつつも、再組換えによる複製型ウイルスの生成リスクを低減しています。
● エンベローププラスミド（Envelope plasmid）
VSV-G（Vesicular Stomatitis Virus Glycoprotein）をコードし、広範な細胞種に対する感染性を付与します。CMVプロモーターによって高発現が誘導され、パッケージングされたウイルス粒子の膜構造を形成します。
この第三世代レンチウイルスシステムは、安全性・安定性・感染効率の観点から、研究用途における最も推奨される設計です。特に「自己不活性化（SIN）」設計により、宿主ゲノムへの挿入後にウイルス由来の活性を残さない構造となっており、in vivo/in vitro の長期遺伝子発現にも適しています。
レンチウイルス パッケージング
第三世代レンチウイルスシステムでは、目的遺伝子を含む転送プラスミド（Transfer plasmid）と、パッケージングプラスミド（Gag/Pol, Rev）およびエンベローププラスミド（VSV-G）を、293Tパッケージング細胞に同時トランスフェクション（導入）します。
導入後、48～72時間でウイルス粒子が細胞上清中に分泌されるため、このタイミングでウイルスを回収します。ウイルス収穫までの間、培地は新鮮なものに交換し、細胞外因子の影響を除去してください。
回収されたウイルスは、生体外（in vitro）実験に使用されます。さらに、濃縮・精製処理された超純化レンチウイルスは生体内（in vivo）研究にも対応可能です。
品質管理
レンチウイルスの検定は、ウイルスの品質と導入効率を確認するために実施されます。研究に使用されるすべてのレンチウイルスは、厳密な品質管理下で評価され、適切な検出ラベル（例：ルシフェラーゼレポーター遺伝子）を付与しています。
Cyagenでは、ウイルス導入後の発現解析をルシフェラーゼアッセイやqPCR（定量PCR）によって実施し、目的遺伝子の導入と発現レベルを定量的に検証します。これにより、信頼性の高い実験結果と再現性の確保が可能となります。
サービス
| レンチウイルス パッケージング | 成果物 | 作製時間 | アプリケーション |
| 標準的 | ウイルス凍結包装 (力価: ≥1×108TU/ml, 濃縮: 1ml) |
2-3週間 | 細胞形質導入 |
| 大規模 | ウイルス凍結包装 (力価: ≥1×109TU/ml, 濃縮: 1ml) |
2-3週間 | 細胞形質導入 |
CyagenはカスタムのshRNAとgRNAレンチウイルスパッケージサービスも行っております。
遺伝子編集システムは、生体内および生体外において特定遺伝子の発現を効果的に破壊する手段として広く利用されています。
レンチウイルスベースの編集構成体を用いることで、ガイド配列（gRNA）および編集酵素（ヌクレアーゼ）が安定的に発現し、モデル動物全体または特定の細胞群に対する編集処理が可能となります。
当社では、2ベクター型の遺伝子編集システムを採用しています：
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gRNA発現用レンチウイルスベクター
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編集酵素（核酸切断酵素）発現用レンチウイルスベクター
この構成により、柔軟な遺伝子改変戦略の設計が可能であり、目的に応じた高効率なノックアウト・ノックイン操作が実現できます。
1. レンチウイルスベースのgRNAベクトル
レンチウイルスgRNAベクターは、5'LTRから3'LTRに至るまでのウイルス由来配列を基盤とし、アンピシリン耐性遺伝子、複製起点（pUC ori）などのバクテリアでの増殖に必要なエレメントも含んでいます。また、U6プロモーターによるガイドRNA（gRNA）の発現カセットを搭載しており、単一または複数の標的部位に対する遺伝子編集設計に対応しています。
このベクターは、安定的な細胞株への導入や動物モデルでの遺伝子操作に広く活用されており、高効率か つ柔軟な遺伝子制御を実現するための基盤となります。
2. レンチウイルスベースの核酸エフェクター発現ベクター
本ベクターは、CBhプロモーターにより標的遺伝子制御用のエフェクタータンパク質および薬剤耐性遺伝子の同時発現を可能にします。
二成分型の遺伝子制御システムにおいて、本ベクターはガイド分子とエフェクターを別個のベクターで導入・発現する構成に対応しており、異なる薬剤選択マーカーを組み合わせることで、両者を安定的に導入したクローンの効率的な選抜が可能です。
品質保証
Cyagenでは、すべてのベクター構築プロジェクトにおいて制限酵素マッピングによる構造確認を実施しており、さらにご要望に応じてシーケンス解析による配列精査も対応可能です。
これにより、お客様の研究施設で安心してご使用いただける高品質かつ信頼性の高いベクターを提供いたします。
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Cyagenは、お客様が抱える高度かつ複雑な研究課題に対しても、最適なソリューションをご提案いたします。
