サイヤジェンの特徴
- 作製期間の早さ
- 高品質
- グローバルサプライヤー
- リーズナブルな価格設定
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CRISPR/Cas ノックインマウス
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サイヤジェン株式会社では、CRISPRを用いた技術で大きなフラグメントのノックイン、任意遺伝子座への導入、コンディショナルノックインマウスの作製が、最短4カ月から可能です。また、競争力の高い価格でご提供致します。弊社は、最大4kb(コンディショナルノックインの場合は3kbまで)のフラグメントをノックインしたファウンダーマウス3匹以上納品を保証致します。 大きなフラグメンントのノックインやコンディショナルノックインは、案件ごとに査定を行います。ご希望の遺伝子を教えていただいて、マウスモデルを作製いたします。（ノックインの場合はご希望の標的部位をご相談ください。）
◆ ノックインマウス(全ての遺伝子座)、コンディショナルノックインマウス作製の流れ
◆ サービスの内容
大きなフラグメントのノックイン/コンディショナルノックインのストラテジーデザイン
ご希望の遺伝子名を教えて頂いて、弊社からストラテジーをデザインいたします。これにはドナーベクターとgRNAベクターのデザイン、また標的上のヌクレアーゼ活性を最大化しオフターゲット効果を最小限にする、最適化されたアルゴリズムに基づいた標的部位の選択も含まれています。そして、ファウンダーマウスのスクリーニングのため、PCRとシークエンシングに基づくジェノタイピング分析のデザインも行います。
CRISPR ノックイン/コンディショナルノックインベクターの構築
ご希望のヌクレアーゼ及びドナーベクターを発現するDNAベクターを構築します。必要に応じて、これらのベクターの有効性を細胞培養でテストします。
CRISPR/Cas マウス卵へのインジェクション
- mRNAの準備: ヌクレアーゼ発現ベクターはin vitroで転写します。mRNA 産物は人工的ポリアデニル化とキャップされ哺乳類細胞における適切な翻訳を容易にします 。
- ファウンダー獲得のためのヌクレアーゼインジェクション: ヌクレアーゼmRNAとドナーベクターを受精卵へ同時にインジェクションした後、代理母へ受精卵を移植し、子孫を獲得します。ヌクレアーゼ発現ベクターを当社でデザイン・構築した場合、保証を満たすのに十分な数の受精卵もしくは標的にインジェクションします。ヌクレアーゼ発現ベクター(もしくはmRNA)をお客様にご提供いただく場合、少なくとも200〜300個の受精卵（株に基づく）へインジェクションし、ご希望の突然変異を持つファウンダーのスクリーニングを行います。ファウンダーが特定されない場合、追加料金をお支払いいただくことで、更に多くのインジェクションが可能です。
ファウンダースクリーニング
ノックイン/floxedファウンダーマウスと同定するため、スクリーニングを行います。具体的には、CRISPRの標的部位のPCRを拡大し、全ての挿入を明らかにします。時々、二本鎖とも編集される場合がございます。コンディショナルノックインでは、重要なエキソンの両側にloxpが挿入されたマウスを、floxedマウスとみなされます。
F1マウス獲得のための繁殖
プロジェクトによっては、ファウンダーマウスが最終成果物となります。しかし、F1マウスの獲得がご希望の方も多くいらっしゃいます。当社では、野生型マウスと掛け合わせることのできる3匹のファウンダーマウスを繁殖します。そして、それらの子孫のジェノタイプを行い、大きなフラグメントのノックイン/floxedを有するF1マウスを獲得します。
