サイヤジェンの特徴
- 作製期間の早さ
- 高品質
- グローバルサプライヤー
- リーズナブルな価格設定
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CRISPR/Cas ノックインラット
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Cyagen ではCRISPR用いたご希望の遺伝子座へのノックインをご提供します。当社では、最大2kbまでのノックイン/コンディショナルノックアウト動物を最低3匹以上納品することを保障いたします。大きなフラグメントの場合、個別のケースごとに評価いたします。
◆ 大きなフラグメントのノックインラット/コンディショナルノックアウトラットサービスの流れ
◆ サービスの詳細
ノックイン/コンディショナルノックアウトストラテジーデザイン
ターゲット遺伝子名を教えてください。弊社の方でトラテジーを設計します。設計には、ドナーベクターおよびgRNAベクターの設計、ならびにターゲット上のヌクレアーゼ活性を最大化し、ターゲット外活性を最小限にするアルゴリズムに基づくターゲット部位の選択が含まれます。 PCRおよびシークエンスに基づくジェノタイピングアッセイもまた、ファウンダーラットのスクリーニングのために設計します。
ノックイン/コンディショナルノックアウトベクター構築
ご希望のヌクレアーゼおよびドナーベクターを発言するDNAベクターを構築します。必要に応じて、これらのベクターの有効性を細胞培養において検査します。
CRISPR/Casの受精卵へのインジェクション
- mRNAの調整：ヌクレアーゼ発現ベクターをin vitroで転写します。獲得したmRNAは人工的にポリアデニル化され、哺乳動物細胞に置けるタンパク質へ適切に翻訳されます。
- ファウンダー獲得のためのヌクレアーゼインジェクション：ヌクレアーゼmRNAとドナーベクターを受精したラット卵へ同時にインジェクションし、代理母に移植して子孫を獲得します。 ヌクレアーゼ発現ベクターを当社で設計および構築する場合、保証を満たすのに十分な数のインジェクションを行います。 ヌクレアーゼ発現ベクター（またはmRNA産物）をお客様からご提供いただく場合、ご希望の突然変異をもつファウンダー獲得のために少なくとも200~300個の受精卵（株に基づく）にインジェクションし、スクリーニングを行います。 ファウンダーが特定されていない場合は、追加料金でより多くのインジェクションを行うことができます。
ファウンダースクリーニング
PCRおよびシークエンシングで、ファウンダーラットのスクリーニングをします。 具体的には、ターゲット部位をPCR増幅して挿入を明らかにします。標的部位の2本鎖とも編集される可能性がございます。コンディショナルノックアウトでは、重要なエキソンに隣接する対立遺伝子に2つのloxPを持つ場合floxedラットと同定されます。
F1獲得のためのファウンダー繁殖
いくつかのプロジェクトでは、ファウンダーラットが成果物になります。 しかし、F1ラットを獲得するためにファウンダーをさらに繁殖をご希望される方もいらっしゃいます。 そこで、一致する系統の野生型ラットに3匹のファウンダーを繁殖させ、ノックイン/floxed対立遺伝子を有するF1ラットを獲得することができます。
